Séparation et purification des protéines dans un atelier de génie génétique

Séparation et purification des protéines dans un atelier de génie génétique

La séparation et la purification des protéines constituent la technologie de base de l'industrie biologique et un maillon important des ateliers de génie génétique de l'industrie pharmaceutique ; les principes de base de la séparation et de la purification des protéines recombinantes sont la capture, la purification brute et la purification. Le processus général de séparation et de purification est le suivant : Tout d'abord, le matériel biologique est pré...

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Isolement et purification des protéines dans un atelier de génie génétique

La séparation et la purification des protéines constituent la technologie de base de l'industrie biologique et un maillon important des ateliers de génie génétique de l'industrie pharmaceutique ; les principes de base de la séparation et de la purification des protéines recombinantes sont la capture, la purification brute et la purification. Le processus général de séparation et de purification est le suivant : Prétraitez d'abord le matériel biologique pour séparer la protéine recombinante des cellules, puis sélectionnez une méthode de séparation et de purification appropriée en fonction des propriétés de la protéine à purifier, telles que le point isoélectrique. de la protéine, solubilité dans différentes solutions salines, etc. La méthode de séparation par précipitation peut être utilisée pour les propriétés ; la technologie de séparation membranaire peut être utilisée en fonction du poids moléculaire des protéines ; la chromatographie par échange d'ions, la chromatographie sur tamis moléculaire, la couche hydrophobe peuvent être sélectionnées en fonction de la différence de charge, de la taille moléculaire, de l'hydrophobicité et de la spécificité d'affinité avec d'autres biomolécules chromatographie et chromatographie.

Prétraitement des échantillons de protéines, le processus de prétraitement implique généralement la séparation ou l'enrichissement de cellules ou de bactéries, et les méthodes de centrifugation et de filtration sont utilisées, ce qui nécessite l'état du bouillon de fermentation et du bouillon de culture pour améliorer la séparation solide-liquide. Vitesse; le prétraitement du bouillon de fermentation ou du bouillon de culture de souches et de cellules génétiquement modifiées consiste à réduire la viscosité de la solution en ajustant le pH, le chauffage et d'autres traitements dans le but d'assurer la stabilité de l'activité biologique de la protéine, en modifiant les propriétés de la solution et rendre l’État plus propice aux actions de suivi. Certains des produits exprimés par des souches et des cellules génétiquement modifiées peuvent être sécrétés à l'extérieur des cellules, mais la plupart d'entre eux existent dans les cellules. Ce n'est qu'une fois les cellules brisées que les produits contenus dans les cellules peuvent être libérés au maximum dans la phase liquide pour une extraction ultérieure. Les méthodes de fragmentation cellulaire comprennent une méthode de fragmentation mécanique et une méthode de fragmentation non mécanique ; la méthode de fragmentation non mécanique utilise principalement des facteurs physiques et des substances biochimiques pour briser les cellules, notamment la méthode de gel-dégel, la méthode de lyse chimique, la méthode d'hydrolyse enzymatique, etc. ; méthode de fragmentation mécanique Elle utilise principalement la force mécanique des phases liquide et solide pour briser les cellules. L'homogénat après fragmentation cellulaire contient une grande quantité de débris cellulaires, qui doivent être séparés avant une extraction et une séparation ultérieures. Actuellement, des méthodes telles que la filtration, la centrifugation et l’extraction en phase aqueuse sont principalement utilisées. Zhongjing Global Purification peut fournir des services de conseil, de planification, de conception, de construction, d'installation, de transformation et d'autres services de soutien pour les ateliers propres et les ateliers propres de génie génétique.

La technologie de séparation par membrane est une technologie d’opération de séparation de fluides représentée par des membranes de séparation polymère. Parce que la technologie de séparation par membrane présente de nombreux avantages que les autres technologies de séparation n'ont pas : la concentration ne nécessite pas de changement de phase, le coefficient de séparation est élevé, la sélectivité de séparation est forte et elle ne nécessite pas d'évaporateur ou d'équipement de réfrigération, un faible coût d'investissement et une faible consommation d'énergie ; La technologie de séparation par membrane présente de nombreux avantages et importances et est largement utilisée dans l'industrie biologique et alimentaire, l'ingénierie environnementale, l'industrie pharmaceutique et bien d'autres aspects. La technologie de séparation par membrane utilise une membrane semi-perméable comme couche barrière sélective. Il existe une certaine différence d'énergie des deux côtés de la membrane en tant que force motrice, permettant à certains composants de passer à travers tout en retenant d'autres composants dans le mélange, et la migration de chaque composant à travers la membrane. C'est une technologie qui atteint l'objectif de séparation avec des taux différents ; la membrane est un matériau doté d'une fonction de séparation sélective, et la séparation sélective de la membrane est utilisée pour réaliser la séparation, la purification et la concentration de différents composants du liquide d'alimentation. Elle diffère de la filtration traditionnelle en ce sens que la séparation s'effectue dans la gamme moléculaire et que ce processus est un processus physique qui ne nécessite pas de changement de phase ni d'ajout d'additifs. La taille des pores de la membrane est généralement de l’ordre du micron. Membranes d'ultrafiltration, membranes de nanofiltration et membranes d'osmose inverse ; selon différents matériaux, elles peuvent être divisées en membranes inorganiques et membranes organiques. Les membranes inorganiques sont principalement des membranes en céramique et des membranes métalliques, qui ont une faible précision de filtration et une faible sélectivité.

L'ultrafiltration est un procédé membranaire entre la microfiltration et la nanofiltration. La taille des pores de la membrane est comprise entre 0,05 et 1 000 μm. L'ultrafiltration est une technologie de séparation par membrane qui permet de purifier, séparer et concentrer les solutions. La différence de pression des deux côtés de la membrane est la force motrice et la membrane d'ultrafiltration est utilisée comme média filtrant. Sous une certaine pression, lorsque l'eau coule à travers la surface de la membrane, seules l'eau et les petites substances moléculaires plus petites que la taille des pores de la membrane sont autorisées à passer à travers pour réaliser la purification de la solution, la séparation et la concentration. La microfiltration appartient à la filtration de précision. Le principe de base est le processus de séparation par tamisage. Le champ d'application de la membrane de microfiltration consiste principalement à intercepter les particules, les bactéries et autres polluants de la phase gazeuse et de la phase liquide, afin d'atteindre l'objectif de purification, de séparation et de concentration. La nanofiltration est une technologie de séparation membranaire entre l'ultrafiltration et l'osmose inverse. Son seuil de poids moléculaire est compris entre 80 et 1 000 Da et la taille des pores est de plusieurs nanomètres. Basé sur la supériorité de la technologie de séparation par nanofiltration, il est largement utilisé dans l’industrie biochimique, pharmaceutique, alimentaire et dans de nombreux autres domaines offrant de larges perspectives d’application.

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