Separação e purificação de proteínas em oficina de engenharia genética

Separação e purificação de proteínas em oficina de engenharia genética

A separação e purificação de proteínas é a tecnologia central da indústria biológica e um elo importante nas oficinas de engenharia genética da indústria farmacêutica; os princípios básicos de separação e purificação de proteínas recombinantes são captura, purificação bruta e purificação. O processo geral de separação e purificação é: Em primeiro lugar, o material biológico é pré...

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Isolamento e purificação de proteínas em oficina de engenharia genética

A separação e purificação de proteínas é a tecnologia central da indústria biológica e um elo importante nas oficinas de engenharia genética da indústria farmacêutica; os princípios básicos de separação e purificação de proteínas recombinantes são captura, purificação bruta e purificação. O processo geral de separação e purificação é: Primeiro pré-processar o material biológico para separar a proteína recombinante das células e, em seguida, selecionar um método apropriado de separação e purificação de acordo com as propriedades da proteína a ser purificada, como o ponto isoelétrico da proteína, solubilidade em diferentes soluções salinas, etc. O método de separação por precipitação pode ser usado para propriedades; a tecnologia de separação por membrana pode ser usada de acordo com o peso molecular da proteína; cromatografia de troca iônica, cromatografia de peneira molecular, camada hidrofóbica pode ser selecionada de acordo com diferença de carga, tamanho molecular, hidrofobicidade e especificidade de afinidade com outras biomoléculas Cromatografia e Cromatografia.

Pré-tratamento de amostras de proteínas, o processo de pré-tratamento geralmente envolve a separação ou enriquecimento de células ou bactérias, e são utilizados os métodos de centrifugação e filtração, o que requer o estado do caldo de fermentação e do caldo de cultura para melhorar a separação sólido-líquido. Velocidade; o pré-tratamento do caldo de fermentação ou caldo de cultura de cepas e células geneticamente modificadas visa reduzir a viscosidade da solução ajustando o PH, aquecimento e outros tratamentos sob a premissa de garantir a estabilidade da atividade biológica da proteína, alterando as propriedades de a solução e tornar o estado mais propício à acção de acompanhamento. Alguns dos produtos expressos por cepas e células geneticamente modificadas podem ser secretados fora das células, mas a maioria deles existe nas células. Somente depois que as células são quebradas é que os produtos nas células podem ser liberados para a fase líquida em sua maior extensão para extração adicional. Os métodos de fragmentação celular incluem método de fragmentação mecânica e método de fragmentação não mecânica; o método de fragmentação não mecânica utiliza principalmente fatores físicos e substâncias bioquímicas para quebrar as células, incluindo principalmente o método de congelamento-descongelamento, método de lise química, método de hidrólise enzimática, etc.; método de fragmentação mecânica Utiliza principalmente a força mecânica das fases líquida e sólida para quebrar as células. O homogeneizado após a fragmentação celular contém uma grande quantidade de detritos celulares, que devem ser separados antes de maior extração e separação. Atualmente, métodos como filtração, centrifugação e extração em fase aquosa são usados ​​principalmente. A Zhongjing Global Purification pode fornecer consultoria, planejamento, projeto, construção, instalação, transformação e outros serviços de apoio para oficinas limpas e oficinas limpas de engenharia genética.

A tecnologia de separação por membrana é uma tecnologia de operação de separação de fluidos representada por membranas de separação de polímeros. Porque a tecnologia de separação por membrana tem muitas vantagens que outras tecnologias de separação não têm: a concentração não requer mudança de fase, o coeficiente de separação é grande, a seletividade de separação é forte e não requer evaporador ou equipamento de refrigeração, baixo custo de investimento e baixo consumo de energia; a tecnologia de separação por membrana tem muitas vantagens e importância e é amplamente utilizada na indústria biológica e alimentícia, engenharia ambiental, indústria farmacêutica e muitos outros aspectos. A tecnologia de separação por membrana utiliza uma membrana semipermeável como camada de barreira seletiva. Há uma certa diferença de energia em ambos os lados da membrana como força motriz, permitindo a passagem de alguns componentes enquanto retém outros componentes na mistura, e a migração de cada cabeça de componente através da membrana. É uma tecnologia que atinge o objetivo de separação com taxas diferenciadas; a membrana é um material com função de separação seletiva, e a separação seletiva da membrana é usada para conseguir a separação, purificação e concentração de diferentes componentes do líquido de alimentação. É diferente da filtração tradicional porque a separação da membrana pode ser realizada na faixa molecular, sendo esse processo um processo físico, que não requer mudança de fase e adição de aditivos. O tamanho dos poros da membrana é geralmente mícron. Membranas de ultrafiltração, membranas de nanofiltração e membranas de osmose reversa; de acordo com os diferentes materiais, podem ser divididos em membranas inorgânicas e membranas orgânicas. As membranas inorgânicas são principalmente membranas cerâmicas e membranas metálicas, que apresentam baixa precisão de filtração e baixa seletividade.

A ultrafiltração é um processo de membrana entre a microfiltração e a nanofiltração. O tamanho dos poros da membrana está entre 0,05-1000μm. A ultrafiltração é uma tecnologia de separação por membrana que pode purificar, separar e concentrar soluções. A diferença de pressão em ambos os lados da membrana é a força motriz, e a membrana de ultrafiltração é usada como meio filtrante. Sob uma certa pressão, quando a água flui através da superfície da membrana, apenas água e pequenas substâncias moleculares menores que o tamanho dos poros da membrana podem passar para alcançar a purificação da solução, separação e concentração. A microfiltração pertence à filtração de precisão. O princípio básico é o processo de separação por peneira. O escopo de aplicação da membrana de microfiltração é principalmente para interceptar partículas, bactérias e outros poluentes da fase gasosa e da fase líquida, de modo a atingir o objetivo de purificação, separação e concentração. A nanofiltração é uma tecnologia de separação por membrana entre ultrafiltração e osmose reversa. Seu corte de peso molecular está na faixa de 80-1000Da e o tamanho dos poros é de vários nanômetros. Com base na superioridade da tecnologia de separação por nanofiltração, ela é amplamente utilizada na indústria bioquímica, farmacêutica, alimentícia e em muitos outros campos com amplas perspectivas de aplicação.

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